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冬虫夏草原生质体育种及液体富Zn、Se、Ge研究 |
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作者：大刚 文章来源：本站原创 点击数： 更新时间：2007-7-26 【字体：小 大】 |
| 冬虫夏草(Cordycepssinensis)目前难以规模化人工栽培，主要以野生冬虫夏草为主，过渡的滥采滥收造成资源稀少，生态环境遭到严重破坏，同时也远远不能满足市场需要。而我公司发明的冬虫草菌体中主要功效成分与野生冬虫夏草相当，且人工液体培养虫草菌体具有周期短、易控制、成本低、重复性好等优点。因此本课题对冬虫夏草菌丝体进行原生质体制备与再生，优化单酶或复合酶酶解条件，利用原生质体诱变技术，选育多糖高产量冬虫夏草诱变菌株，并以诱变菌株为载体，进行Zn、Se、Ge单元素和三元素富集，优化富集条件，以小白鼠为试材，对谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneperoxidsade，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)等抗氧化指标进行初步检测，得到了以下结论：1、冬虫夏草液体培养基最佳组成为：马铃薯20％，葡萄糖2％，酵母粉0.2％，水1000mL，pH6.0。在此条件下，25℃、160r/min振荡培养4d，生物量达到1.72g/100mL。2、研究了不同酶系统、酶浓度、酶解温度、酶解时间、稳渗剂、pH值、培养时间对冬虫夏草原生质体形成的影响。结果表明，在30℃、pH6.0、1.5％溶壁酶条件下，以0.6mol/L氯化钾作为稳渗剂，酶解3h，原生质体产量达到4.35×107个/mL。3、冬虫夏草原生质体适宜再生培养基为：麦芽糖2％，葡萄糖2％，蛋白胨0.2％，酵母粉0.40％，KH2PO40.20％，MgSO4·7H2O0.15％，维生素B10.001％，维生素B60.001％。再生率达到38.07％。4、冬虫夏草原生质体紫外线辐射至半致死率的照射时间约为20s。根据拮抗反应和生长状况，筛选出100株冬虫夏草原生质体紫外线诱变菌株，以原始出发菌株为对照，从中筛选出10株虫草多糖含量高于原始出发菌株的诱变菌株，编号为024、029、035、036、055、071、078、086、089、098。将10株诱变菌株及原始出发菌株分别连续传代10次，以出发菌株为对照，从中筛选出1株多糖含量更高的诱变菌株，编号为035。5、诱变菌株优化培养基为：马铃薯20％，葡萄糖2％，酵母粉0.4％，KH2PO40.2％，MgSO4·7H2O0.15％，菌丝体生物量达到1.260g/100mL。最佳发酵条件为：pH值6.5、温度25℃、接种量5％、转速120r/min。6、冬虫夏草诱变菌株能够有效地对Zn、Se、Ge进行富集和转化，而且在较低浓度时能够促进菌丝体的生长。培养基中适宜的Zn、Se、Ge添加浓度分别为150μg/mL、60μg/mL、50-1000μg/mL。7、初步确定了培养基中三种元素之间最佳浓度配比，即Zn：100μg/mL，Se：20μg/mL，Ge：200μg/mL。三者之间的相互关系为：Se、Ge浓度的升高能够促进菌丝对Zn的吸收，具有协同效应；Zn、Ge和Se之间不存在竞争，也无协同作用；而低浓度的Zn、Se对Ge的富集有抑制作用，较高浓度的Zn、Se对Ge的富集有促进作用。8、对富Zn、Se、Ge菌丝体多糖的研究表明，用热水抽提的菌丝体多糖含有三种组分，其单糖组成为半乳糖、葡萄糖和甘露糖。9、以灌胃蒸馏水为对照，研究了富Zn、Se、Ge冬虫夏草菌粉组、富Zn菌粉组、富Se菌粉组、富Ge菌粉组的小鼠全血的谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和丙二醛含量的影响。结果表明，富Zn、Se、Ge冬虫夏草菌粉组小鼠全血GSH-Px的活性明显增加，12d时最高，分别是对照组的1.037倍、富Zn菌粉组的1.002倍、富Ge菌粉组的1.007倍、富Se菌粉组的1.002倍。10、富Zn、Se、Ge冬虫夏草菌粉组小鼠全血SOD的活性也明显增加，12d时最高，分别是对照组的1.287倍、富Ge菌粉组的1.553倍、富Se菌粉组的1.381倍，而富Zn菌粉组是富Zn、Se、Ge组的1.054倍。11、富Zn、Se、Ge冬虫夏草菌粉组小鼠全血MDA含量明显降低，18d时最低，分别比对照组降低1.696倍、比富Zn菌粉组降低1.191倍、比富Se菌粉组降低1.309倍、比富Ge菌粉组降低1.301倍。GSH-Px、SOD、MDA结果表明，富Zn、Se、Ge冬虫夏草具有较强的抗氧化能力。
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文章录入：大刚 责任编辑：大刚 |
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